1001 Tecnicas histologicas

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Histología I. Dra. Solanche Molinas.

Qué es la Histología?

• Es el estudio científico de las estructuras microscópicas de los tejidos y órganos del cuerpo. • “El estudio del tejido” y se refiere al análisis de la composición microscópica y la respectiva función del material biológico.

• El tejido se forma por la agrupación de células con la misma función. • Los órganos son unidades funcionales mayores, compuestas por distintos tipos de tejidos, por ejemplo el hígado. • Los sistemas de órganos comprenden varios órganos con funciones relacionadas, por ejemplo, el aparato respiratorio, formado por la nariz, laringe, la tráquea. • Los sistemas difusos definen grupos celulares con funciones relacionadas, localizadas en varios órganos distintos, por ejemplo el sistema inmune.

• Si bien por su etimología la palabra histología significa el estudio de los tejidos, la asignatura histología incluye, además, la estructura de las células y de los órganos, es decir, el estudio de las células o citología, el estudio de los tejidos o histología propiamente dicha y el estudio de la estructura de los órganos o histología especializada.

Técnicas histológicas.

Preparación de tejidos.

Tinción con hematoxilina y eosina. • Cada grupo de estudiantes, recibe un preparado junto con el microscopio óptico. Por lo general están fijadas con formalina, incluidas en parafina y coloreadas con hematoxilina y eosina.

El primer paso: • Preparación de la muestra de tejido u órgano es la fijación para conservar la estructura. • La fijación conserva de forma permanente la estructura del tejido para tratamientos posteriores. • Las muestras deben sumergirse en el fijador inmediatamente después de extraerse del organismo.

La fijación se utiliza para: - Abolir el metabolismo celular. - Impedir la degradación enzimática de las células y tejidos por la autolisis (autodigestión) - Destruir microorganismos patógenos tales como bacterias y hongos o virus. - Endurecer el tejido como resultado de la formación de enlaces cruzados o de la desnaturalización de moléculas proteicas.

• El fijador mas común es la formalina, este formaldehido conserva la estructura general de la célula y de los componentes extracelulares al reaccionar con los grupos amino de las proteínas.

El segundo paso: • La muestra se dispone para su inclusión en parafina con el fin de permitir su corte. • Después de la fijación la muestra se lava y se deshidrata en una serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta alcanzar alcohol al 100%. • Seguido, el aclarado, se utilizan solventes orgánicos tales como el xileno que se pueden mezclar tanto en alcohol como en parafinas, para extraer el alcohol antes de la infiltración de la muestra con la parafina fundida.

• Cuando la parafina fundida se ha enfriado y endurecido, se empareja para formar un bloque de tamaño adecuado. Este bloque se coloca en una maquina cortadora especial, el microtomo que lo corta en rebanadas finas con unas cuchillas de acero. • Los cortes obtenidos se montan sobre portaobjetos de vidrio utilizando un medio de montaje como adhesivo.

El tercer paso. • Las muestras se tiñen para permitir su examen. • Los corten en parafina son incoloros. • Para colorear o teñir los cortes histológicos, la parafina debe disolverse y extraerse, xileno y los tejidos deber rehidratarse mediante el uso de unas soluciones de alcohol. • El tejido sobre el porta objeto se tiñe con hematoxilina en agua. • El colorante en contraste, la eosina, es mas soluble en alcohol

Son cortes del pancreas. Se muestra resultado de tinciones, en el A solo con hematoxilina. El en B solo con eosina y en el C Hematoxilina y eosina. (H&E)

• el procedimiento no permite ver de forma adecuada ciertos componentes estructurales de los cortes histológicos tales como elastina, fibras reticulares, membranas basales y lípidos. • Cuando se desea estudiar estos componentes, se pueden utilizar otros procedimientos de tinción, en su mayoría selectivos. • Estos procedimientos incluyen el uso de orceína y fucsina- resorcina para el material elástico y la impregnación argéntica para fibras reticulares y las membranas basales.

TINCION O COLORACION • Luego de realizado el corte, se procede a la rehidratación para permitir su coloración. • Colorantes: reciben esta denominación las sustancias que pueden conferir color a otros cuerpos. • Coloración: es el proceso mediante el cual un cuerpo es teñido por una sustancia colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado al preparar la solución colorante.

CLASIFICACIÓN DE LOS COLORANTES: Según su origen se clasifican en:

COLORANTES NATURALES: - Animales (carmín) - Vegetales (hematoxilina, orceína, azafrán)

COLORANTES ARTIFICIALES O SINTÉTICOS (COLORES DE ANILINA):

- Ácidos: sales cuya base es incolora y su ácido es coloreado (eosina o eosinato de sodio). Son colorantes citoplasmáticos.

- Básicos: sales cuya base es coloreada y el ácido es incoloro (azul de metileno o clorhidrato de azul de metileno). Son colorantes nucleares.

- Neutros: sales en las que tanto el ácido como la base son coloreados. Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro. - Indiferentes: no forman sales. Tiñen aquellas sustancias que tienen un poder disolvente superior al del líquido que ha servido para preparar la solución colorante (Sudán lll, rojo escarlata).

Por otro lado, las coloraciones pueden ser:

- Ortocromáticas: los tejidos adquieren un color igual al de la solución colorante empleada. Ej: azul de toluidina, tejido nervioso

- Metacromáticas: una sustancia o un componente celular se tiñe con un color diferente al del colorante empleado. Ej: azul de toluidina en cartílago joven, células cebadas.

MONTAJE

FUNDAMENTOS QUIMICOS DE LA TINCION. La hematoxilina y la eosina son los colorantes de uso más frecuente en la histología. Un colorante ácido como la eosina, tiene una carga neta negativa (anion) en su parte coloreada. (Na+ anilina-) Un colorante básico tiene carga negativa (cation) en su parte coloreada. (anilina+ Cl-) La hematoxilinica no es exactamente un colorante básico pero tiene propiedades muy semejantes a las de los colorantes básicos.

• Los colorantes básicos reaccionan con los componentes aniónicos de las células y de los tejidos (componentes que tienen carga negativa) • La capacidad de estos grupos aniónicos de reaccionar con una anilina (Colorante básico) se denomina Basófilia. • los colorantes ácidos reaccionan con los grupos catiónicos en las células y los tejidos; en particular, con los grupos amino ionizados de las proteínas. • La reacción de los grupos catiónicos con un colorante acido recibe el nombre de acidofilia.

Microscopia

• Microscopia óptica. • Microscopia electrónica. (microscopio electrónico de transmisión y microscopio electrónico de barrido) • Microscopia de Fuerza Atómica. • Microscopia Virtual.

MICROSCOPIO ÓPTICO.

Microscopia Óptica. • Ya sea simple o compuesto; es un instrumento que amplifica una imagen y permite ver más detalles de lo que es posible a simple vista. • La función de un microscopio es la de ampliar una imagen a un nivel en el que la retina pueda resolver información, que estaría por debajo de la resolución.

• La resolución depende no sólo del sistema óptico, sino también de la longitud de onda de luz y de otros factores como el espesor de la muestra, la calidad de la fijación y la intensidad de la tinción.

El microscopio utilizado por la mayor parte es el microscopio de campo claro. Los componentes del microscopio de campo claro son los siguientes: • Fuente luminosa; para la iluminación de la muestra. • Lente condensador para enfocar el haz de luz a la altura de la muestra. • Platina sobre la que se coloca el portaobjetos. • Lente objetivo para recoger la luz que ha atravesado la muestra. • Lente ocular a través de la cual se puede examinar directamente la imagen formada por la lente de objetivo.

OCULAR

OBJETIVO

PLATINA

LENTE CONDENSADOR

FUENTE LUMINOSA

Otros Sistemas Ópticos. Además del MO de campo claro, hay otros sistemas ópticos como: 1. Microscopio de contraste de fase; se utilizan para aumentar el contraste sin teñir. 2. Microscopios de fluorescencia y confocales; diseñados para visualizar estructuras mediante el uso de técnicas especificas. Como la inmunofluorescencia.

MICROSCOPIO ELECTRONICO.

Hay dos tipos de microscopios electrónicos que proporcionan datos morfológicos y analíticos en las células y tejidos; - El microscopio electrónico de transmisión (MET) - El microscopio electrónico de barrido (MEB)

La óptica del microscopio electrónico es similar a la del microscopio óptico., excepto que el de MET utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz. • Una fuente de electrones (cátodo, cañón de electrones). • Los electrones son atraídos hacia un ánodo. • Hay una diferencia eléctrica entre el cátodo y el ánodo que imparte a los electrones un voltaje de aceleración entre 20.000 y 200.000 voltios, generando el haz de electrones.

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